QQ:1932526095
蛋白表达,抗体定制
咨询电话
029-88081325
在线客服

常用抗体的应用范围

普罗抗体,蛋白表达 2018-08-30

常用抗体的应用范围及选用方案

在临床活检工作中,对于各种肿瘤的正确判断,历来是外科病理学的核心问题。因它关系到患者的治疗和预后的问题。在免疫组化 技术没开展以前,主要靠HE,特殊染色和组织化学来进行鉴别和诊断各种肿瘤,这些在当时虽然解决了不少的问题,但是对于较为复杂,较为多型性的肿瘤,就不能对其起源及所含的成分作出正确的判断。

 

随着免疫组化工作的开展,给许多以往有待于解释原因的病理诊断上带来了福音。许多以往无法解释原因的病例,经现今免疫组化染色技术的处理后,能够对其起源,相关的抗原 或抗体成份给予显示出来,为肿瘤的诊断提断了形态学的依据。虽然如此,对于一些较为复杂的抗原,就要根据具体情况作具体分析。

 

在生物界里面某些细胞仅具有一个抗原的决定簇,这是极少见的,而常见的是具有数百个乃至数千个的抗原决定簇。数量之多但又不是千篇一律,并非都在细胞的表面表达出来,加上细胞的排列有高有矮,有长有短,切片时有的被切到细胞膜,有的被拦腰斩断,因此在一张切片上看到的同一种抗原的表达也不一致,有的在细胞核 ,有的在细胞膜,也有的在细胞浆,这种现象是由于切片的原因所致。但是,抗原的表达,在原来的表达上就有核、浆、膜之分。有的抗原可在一个部位表达,有的抗原 则可在两个 部位表达 ,例如PCNA,它可以在细胞核表达,也可在细胞浆表达 。有的抗原,可表现为双向表达,如上皮()肿瘤间皮肿瘤和滑膜内瘤等,用角蛋白标记时,可有阳性表达,用波形蛋白标记时,也可有阳性表达。

 

对于上述的许多现象,在观察检测时,就要特别地小心,不断地积累经验,以便于更好地鉴别各种抗原的所在部位。某些抗原不是在任何时候能表达出来的它们 需要一定的时间和条件。有人根据肿瘤细胞增生的能力将其分为三个阶段:

 

1.进入细胞周期的增殖细胞,这包括G1G2M期的细胞。

 

2.暂时未进入细胞周期,但在某特定的时期和条件下,使其开始增殖的细胞(G0)

 

3. 静止的永不再进入增殖周期的细胞,这些细胞己分化成熟,根据新陈代谢的规律,它们逐渐地进行消之阶段。

 

上述三个阶段中,与肿瘤的发生发展关系最为密切的是增殖细胞。因此,临床检测各种肿瘤抗原的表达,应根据上述 三个阶段来加以区别,仔细加以分析,在作出诊断前,应根据免疫组化的表达,细胞的分化成度来加以区别,不要以为用了某种抗体抗原不表达就确定是不属该抗体来源的肿瘤。有人在检测淋巴瘤活性的研究中,发现PCNA在细胞周期的S期数量增高,G2期下降,核分裂期最低,在 G1期又开始增高。

 

我们在检测各种肿瘤的抗原时发现,在同一病例中,增生的肿瘤细胞抗原表达强,成熟的细胞表达与增生的细胞差不多,幼雅的细胞表达较弱,未分化的细胞呈阴性。基于上述的情况,我们应充分认识到,诊断各种肿瘤,免疫组化起到了重要的作用中,它可以为诊断提供可靠的准确的形态学依据,它为肿瘤的来源的定性,提供了理论及实物。但是,我们也应该认识到,任何事情都 不能有百分之百的准确,免疫组化的检测也一样,有时也会受到未分化细胞的制约,因此,在作出诊断前,应多做多方面的检查,结合各方面的情况,作出正确的判断。

 

为了更好地应用各种抗体来检测相应的抗原,下面我们将介绍常用抗体检测范围。

 

()、常用上皮组织及肿瘤标记物

 

角蛋白(Keratin)

 

角蛋白分为表皮角蛋白和细胞角蛋白两种,这是根据其分部的部位而分的。表皮角蛋白包括皮肤表皮,消化道粘膜上皮、腺上皮甲状腺滤泡上皮、气管、支气管上皮、肺泡上皮,角膜上皮、前列腺上皮等。细胞角蛋白包括颌下腺,胰腺,胸腺,细胞,肝细胞,肾小管细胞等。目前,应用上述细胞中间丝角蛋白作为抗原所制备的抗体有单克隆抗体和多克隆抗体。角蛋白可有19个亚型 ,分为碱性和酸性,从1-8为碱性,9-19为酸性,分子量40-68不等,复层鳞上皮多为高分子量,单层上皮则多为低分子量,了解这些在临床的鉴别诊断及抗体的应用中都 有极大的帮助。目前,检测这类特质的抗体很多,根据不同的克隆生产出不周类型的抗体。常用的抗体有:

 

①单克隆小鼠抗人细胞角蛋白(Monoclonal mouse anti human cytokeratin)克隆为MNF116

 

该抗体应用范围,各类的冰冻切片,涂片,细胞培养片和经甲醛固定石蜡包埋的组织切片 。用本抗体检测的阳性组织有:鳞状上皮,甲状腺滤泡上皮消化道上皮,胰腺胆管上皮,肝胆管上皮,角膜上皮等以及发生于上述来源的肿瘤。应该注意的是有一些肿瘤在检测时,可出现两种阳性物,即用两种抗体来检测如采用CKVimentin,可出现双向表达阳性的肿瘤有:癌内瘤,子宫内膜腺癌肺腺癌,上皮样内瘤,滑膜内瘤,唾液腺肌上皮瘤,间皮瘤等等。这是由于在这些肿瘤中存在着两种不同的中间丝的缘故。

 

应用该抗体检测呈阴性的肿瘤有:各种淋巴瘤,各类肌源性的肿瘤,恶性黑色素瘤,骨肿瘤,纤维组织肿瘤,脂肪肿瘤,神经组织肿瘤和精原细胞瘤等。

 

在检测某些肿瘤时,常可出现这样的问题,在同一张切片上,同样的鳞状细胞癌的细胞,有的抗原表达为强阳性,有的表达为中度阳性性,有的表达为弱阳性,甚至有的呈阴性。这主要是由于各种细胞处于增生的不同阶段,细胞分泌的抗原量不同,因而表达 也不同。

 

该抗体可用各种方法检测,但最好用真空负压LSAB法。产品说明书注明该抗体稀释度1501100,我们使用为1100

 

②单克隆小鼠抗人细胞角蛋白,克隆为LP34。该抗体的使用范围,检测各种组织基本上与①号抗体相同,但效果不如①号。

 

③单克隆小鼠抗 人细胞角蛋白,克隆为35BH11。该抗体的特点是:A,可检测几乎所有的非鳞状上皮包括卵巢腺癌,胃肠道腺癌,甲状腺癌,肝癌, 子宫癌,肾癌等。B、不与鳞状上皮起反应。C、对膀胱癌,鼻咽癌,胸腺癌等部分阳性。但是,该 抗体只能用于冰冻切片 ,涂片和细胞培养片。不能用于石蜡切片

 

④单克隆小鼠抗 人细胞角蛋白,克隆34BE12。该 抗体属于高分子量类型,它可检测鳞状上皮管上皮和 复层上皮的组织及其来源的肿瘤。

 

适用范围:可用于各种类型的切片

 

2. 单克隆小鼠抗人上皮细胞膜抗原 (Monoclonal mose anti human epithelial memberance antigen,EMA)

 

上皮细胞膜抗原是上皮细胞表面大分子糖蛋白物质,它不仅存在于各种上皮,以及各种上皮来源的肿瘤,也可存在于部分非上皮及其来源的肿瘤,如浆细胞,组织细胞等。

 

应用EMA来检测正常的组织时,其阳性表达主要在细胞膜上,但在检测肿瘤时,这种阳性物不仅在细胞膜上出现,也可在细胞浆中见到。实验中发现,肿瘤细胞在分化增生时,阳性物表达强阳性。当肿瘤细胞趋于成熟或已成熟时,阳性物表达较弱,肿瘤细胞未分化时,抗原表达呈阴性。

 

EMA在检测上皮组织及其来源的肿瘤组织时,抗原表达阳性,在检测非上皮来源的肿瘤如浆细胞瘤,滑膜内瘤,上皮样内瘤,平滑肌内瘤,神经鞘瘤,及来恶性神经鞘瘤时,抗原也可表达为部分阳性。因此认为:EMA不是上皮性来源肿瘤所特有的标记物,它的特异性不高。

 

抗体适用范围广,适合于各种类型的切片,应用真空负压LSAB法检测时,稀释度在1100

 

3. 癌胚抗原(Carcinombryonic antigen ,CEA)

 

1965Gotel等从结肠癌分离出一种肿瘤的相关抗原后,经过进一步的研究后发现,它存在于胎儿的肠里,由于人们将其称为癌胚抗原。在实际应用中,CEA是一种广谱的标记物。经实验证明,它对胃癌,肠癌,肺癌,乳腺癌,胰腺癌,子宫颈癌,子宫体腺癌,卵巢癌,皮肤鳞状细胞癌,膀胱移行上皮癌,食道癌等,抗原表达阳性,在上述的同类组织及癌旁类性组织,也可见到阳性物,有文献报导,用CEA标记滑膜内瘤,间皮瘤,上皮样内瘤和脑膜瘤,也可表达阳性。

 

目前,CEA有两种产品,一是单克隆抗体,另一是多克隆抗体。

 

单克隆小鼠抗 CEA,克隆为A5B7

 

该抗体的特点,纯度高,杂质含量少,很少引起非特异性染色,同时,也不与含糖蛋白的物质起反应,因此,背景清晰干净。

 

该抗体可检测上述的病种及其来源的组织,适用于各种切片的染色。稀释度为1100

 

兔抗人CEA。该抗体为多克隆抗体,纯度不如①号抗体,检测及适应与①号抗体相同,但效果不如①号抗体,且较容易产生背景。稀释度在1300

 

4.山羊抗人甲胎蛋白(Goat anti human alphafeloprotein,AFP)

 

AFP主要由胎儿肝细胞和卵黄细胞产生的一种酸性糖蛋白少量由胎儿的胸腺、肺、胃、肠道的细胞产生。AFP也不是一种肝癌特有的标记物。初用时把AFP作为原发性肝癌的一项特异性诊断指标。随着免疫组化的深入开展和研究的深入进行,实验结果证明:AFP的升高不仅在原发性肝细胞癌的病例,在生殖细胞肿瘤卵黄瘤和睾丸胚胎癌的病例也可大量见到。

 

AFP检测后显示阳性的病例有:原发性肝细胞癌,胃癌,卵黄 瘤和睾丸胚胎癌等。其阳性 表达部位主要在细胞浆,也有少量在细胞膜和细胞核上。

 

该抗体适合于各种切片的标记,可用任何一种 免疫 方法来进行染色,稀释度为1100-1300

 

上述四种类型的抗体可作为来源于上皮的肿瘤及其它来源的肿瘤的区别。只要损伤正确,抗体的质量没问题,就可获得满意的结果。使用时应根据不同的组织,不同的形态结构,来选择合适的抗体。当然有的肿瘤决不是用一两种抗体就能够把它们给予区分开来。因此,要根据不同的情况合理使用抗体,以便作出正确的诊断。

 

()常用的间叶源性组织及其肿瘤的检测抗体

 

间叶源性组织范围广,内容多,它包括肌肉,纤维结缔组织,脂肪,血管,周围神经,骨,软骨,淋巴等组织。由于这方面涉及的东西较多且较复杂,因而在上述方面所发生的肿瘤,是肿瘤病理学中最棘手和最疑难的问题之一。随着免疫组化技术在肿瘤鉴别诊断中的应用,已经克服了许多以往无法克服或者难以克服的问题。当前,应用于这方面检测的抗体越来越多,下面将介绍几种常用的抗体:

 

1.波形蛋白(Vimentin ,Vim)

 

Vim是原始的中间丝,它存在于所有的间叶组织细胞中,可以向神经胶质,肌源性细胞和上皮细胞中间丝演变。Vim是一种单克隆抗体,临床应用来作鉴别诊断的有:鉴别癌与内癌,前者阴性,后者阳性;鉴别小细胞性肿瘤,这时应多用几种抗体,如CKLCAVim,如为淋巴瘤,尤文氏瘤或神经母细胞瘤,Vim为阳性;鉴别黑色素瘤和低分化癌时,Vim阳性。

 

应用Vim检测肿瘤阳性的有:HDR-S细胞,B免疫母细胞形淋巴瘤,浆细胞瘤,T 免疫母细胞及多形性T 淋巴瘤,平滑肌瘤和肉瘤,纤维瘤和肉瘤,脂肪瘤和肉瘤,横纹肌肉瘤,血管瘤,粘液瘤,神经纤维瘤,鞘瘤,恶性神经鞘瘤,恶性纤维组织细胞瘤,纤维组织细胞瘤,恶性巨细胞瘤,间叶肉瘤,骨瘤和骨肉瘤,骨巨细胞瘤,软骨细胞瘤,骨软骨瘤,软骨母细胞瘤,软骨肉瘤,滑膜肉瘤,精原细胞瘤,黑色素瘤和恶性黑色素瘤,脊索瘤癌肉瘤,尤文 氏瘤,脑膜瘤,卵泡膜细胞瘤,颗颗细胞瘤,间皮瘤,等等。

 

在正常组织中,Vim标记阳性组织的有:

 

平滑肌和横纹胶肌细胞,肺泡吞噬细胞,血管及内皮细胞,肝脏枯否氏细胞,滑膜细胞,浆细胞,奇形细胞,室管膜细胞,卵巢颗粒细胞,黑色素细胞等。

 

Vim是目前用来鉴别上皮性肿瘤还是间叶源性铁常用抗体之一,不过,在应用于鉴别肿瘤时,应多选用几种抗体。

 

Vim的抗体现市售的有几种:

 

⑴单克隆小鼠抗Vim克隆3B4,该抗体稀释度较高,可在1200,它适用于各种切片,但在使用前必须抗原修复。

 

⑵克隆小鼠抗猪Vim,克隆V9,该抗体较早前使用,从已检测的大量病例情况分析,该抗体效果不错。但该抗体最大的缺点是稀释度较不理想,仅在110左右,由于稀释度不大,标记的例数较少,成本较高,现已较少使用。

 

Von Willebrand因子

 

这种抗体在旧叫法中被称为第Ⅷ因子相关抗原,如今被 称为Von Willebrand因子,它可在各种内皮细胞和巨核细胞的胞浆中找到,因此在临床的应用中,它常被用来检测由内皮细胞来源的各种肿瘤,同时也用来检测骨髓标本中巨核细胞的增殖。该抗体使用前须做抗原修复。注意抗体有单抗 及多抗之分。

 

CD34

 

该抗体被认为是一种稳定的,可靠的血管内皮细胞及其来源的肿瘤的标记物。它对毛细血管,小血管内皮细胞显示强阳性,对中至大血管内皮细胞量选择性阳性,对软组织肿瘤,肿瘤 毛细血管,血管管和血管肉瘤的内皮细胞呈阳性,对淋巴管内皮阴性。使用时须做 抗原修复。

 

CD31

 

该抗体与CD34的标记范围基本一样。

 

()肌组织及其相关肿瘤的常用抗体

 

1. 肌间线蛋白(Desmin,DM)

 

在横纹肌的微细结构中,有明暗带之分,在明暗带的中央有一薄膜称为工膜。在心肌纤维结构中,也有相似的工膜。这些结构的主要成份就是由肌间线蛋白构成的。此外,在心肌的闰盘,平滑肌中,也含有肌间线蛋白。

 

Desmin为一种中间丝蛋白,正常时可分布于平滑肌细胞,心肌细胞骨骼骨细胞和肌上皮细胞。临床应用时常用来检测上述细胞来源的肿瘤如子宫肌瘤及肉瘤,胃,肠道 肌源性肿瘤各形,横纹肌肉瘤和肌上皮瘤等。

 

该抗体适应于各种组织切片,经抗原修复后结果更佳。

 

2.肌球蛋白(Myosin)

 

骨髓肌的微细结构在电镜下可见到肌原纤维是由1-2千条平行的肌丝集成的来组成,肌丝分为粗肌丝和细肌丝两种。粗肌丝由许多豆芽状的肌球蛋白组成。在心肌和平滑肌发育分化中期,也可见到肌球蛋白。

 

目前,临床应用的有两种抗体。